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Instructivo y Video sobre el proceso de recolecciónGuía para profesionales acerca de la recolección de Sangre de Cordón Umbilical.
BANCO DE SANGRE DE CORDÓN UMBILICAL PARA USO AUTÓLOGO. ANÁLISIS DE 1153 MUESTRAS DE LA PRIMERA EXPERIENCIA ARGENTINA.
Bayo, R., Madeo, P. A., Maceri, A. R., Chillik, C.
MaterCell. Pte. J.E.Uriburu 663 2º Piso. C1027AAM Ciudad Autónoma de Buenos Aires. matercell@matercell.com
Introducción
El interés por la utilización de la sangre de cordón umbilical con fines transfusionales estaba presente antes de la segunda guerra mundial según Halbrecht y col. [1], y se incrementó en las décadas del 70’ y 80’ dando lugar a numerosos estudios como los de Paxson y col. [2] y Anderson y col. [3] que investigaron las técnicas de recolección de sangre de cordón umbilical para lograrla en forma estéril y segura, y también su utilidad luego de ser anticoagulada por los medios convencionales de los Bancos de Sangre, para ser utilizada por neonatos gravemente enfermos, como plantearon Golden y col. [4-5], en lugar de la sangre de adulto que habitualmente suplen los Servicios de Medicina Transfusional.
Si bien la presencia de células progenitoras hematopoyéticas en la circulación fetal y en el período perinatal era conocida, fue también en las décadas del 70’ y 80’ cuando proliferaron los estudios, como los de Prindull y col. [6-7], Di Landro y col. [8], y Nakahata y col. [9] para determinar su significación, cantidad y propiedades biológicas. Broxmeyer y col. [10] determinaron finalmente que existía la posibilidad de utilizar estas células como fuente de material hematopoyético trasplantable, y sentaron las bases que hicieron posible su utilización con esos fines, también, dejaron claramente establecido que todas las líneas celulares presentes en la sangre de cordón, capaces de proliferar y reproducirse, mantenían inalterada su capacidad por lo menos hasta tres días después de haber sido recolectadas, con el único agregado de uno de los anticoagulantes utilizados habitualmente en las recolecciones de sangre. Y que se mantenían a la perfección tanto a 4ºC como a 25ºC (temperatura ambiente), pero no a 37ºC.
A posteriori se determinó que la temperatura ideal para mantener esas células, durante el breve lapso entre su recolección y el procesamiento y criopreservación, es la temperatura ambiente, ya que según Campos y col. [11] la cantidad de progenitores disminuye cuando se los mantiene a 4ºC.
Según distintos estudios, como el de Mills y col. [12], existen algunas diferencias entre las células progenitoras de la médula ósea, las células progenitoras hematopoyéticas de sangre periférica y las células madre provenientes del cordón umbilical.
No obstante, a partir de cualquiera de estos tres orígenes se pueden llevar a cabo trasplantes autólogos (los que utilizan células del propio individuo) o alogénicos (los que utilizan células donadas por otro individuo) de progenitores hematopoyéticos, aunque las diferencias que presentan estas tres fuentes celulares en su composición hace que sea también diferente el comportamiento del injerto.
Se considera que las células que presentan un marcador de membrana denominado CD34 son las responsables de la regeneración del tejido sanguíneo. Según Fritsch y col. [13], existen diferencias entre las subpoblaciones CD34 positivas presentes provenientes de las distintas fuentes mencionadas, lo que justificaría las diferencias apuntadas. Wang y col [14], en experimentos utilizando modelos animales demostraron que las células de cordón humanas son capaces de repoblar la médula ósea de ratones con deficiencia inmune severa (SCID), con mayor eficiencia que las células humanas de médula ósea utilizadas como comparación.
Otro de los aspectos importantes es la relativa inmadurez inmunológica de las células de cordón lo que las hace menos reactivas frente a huéspedes parcialmente compatibles, situación que determina una menor incidencia de la Enfermedad de Injerto contra Huésped, en relación a las otras fuentes.
Otra de las diferencias importantes es la capacidad de las células de la sangre de cordón umbilical de replicarse muchas más veces que las células de la médula ósea o las progenitoras de sangre periférica, y esto se debe aparentemente a que son más primitivas y presentan telómeros de mayor longitud y actividad del complejo telomerasa lo que les permite un mayor número de divisiones [15-17].
Es conocida y ampliamente utilizada la posibilidad de criopreservar material biológico, y específicamente células progenitoras de médula ósea o de sangre periférica [18-22]. Las células de cordón umbilical no son una excepción y también toleran perfectamente la congelación a muy bajas temperaturas [23, 24].
Por supuesto que la técnica de criopreservación, la temperatura de almacenamiento y el contenedor del material a criopreservar tienen que ver con el tiempo que dicho material puede mantener su viabilidad. Así, el mantenimiento en viales a cualquier temperatura de criopreservación es muy inferior al que se logra con bolsas de PVC o de poliolefina, y con éstas se verifica que la mejor viabilidad se logra con las temperaturas más bajas [25].
El primer trasplante que se realizó con sangre de cordón umbilical demostró que se cumplían en el contexto clínico aquellos postulados a los que se había arribado mediante la investigación. La “donante” de ese primer trasplante fue una niña, que tenía un hermano de 5 años afectado por una Anemia de Fanconi; pero hubo aspectos muy interesantes en este caso ya que el nacimiento y la subsiguiente recolección de la sangre de cordón realizada por el Dr. Gordon Douglas tuvieron lugar en Durham, Carolina del Norte, esa sangre tuvo que viajar hasta la Universidad de Indiana, donde fue procesada y criopreservada en el laboratorio del Dr. Broxmeyer. A posteriori, ya congelada, la sangre de cordón se envió a París, Francia, donde se encontraba el receptor que fue trasplantado allí exitosamente en el Servicio de la Dra. Eliane Gluckman. El paciente tiene ya más de 20 años y se encuentra vivo y en remisión completa de su enfermedad.
A continuación de ese, se realizaron otros cuatro trasplantes, tres para niños con Anemia de Fanconi y uno con una Leucemia Mielomonocítica Juvenil, también con la característica de que las recolecciones fueron realizadas por el Dr. Gordon Douglas en una unidad obstétrica alejada del lugar donde serían procesadas y criopreservadas: la Universidad de Indiana. De estos solamente uno de los pacientes con Anemia de Fanconi tuvo fallo del injerto [26-29].
Estos resultados dejaron absolutamente demostrado que 1) las células de cordón eran aptas para regenerar una médula ósea funcionante 2) que no perdían su capacidad por haber sido previamente congeladas a bajísimas temperaturas 3) que podían ser recolectadas, trasladadas, criopreservadas y nuevamente trasladadas sin pérdida de su capacidad regeneradora y 4) que podían utilizarse para realizar trasplantes alogénicos con pocas consecuencias indeseables.
Hasta la aparición de esta fuente celular como nueva opción, los pacientes que necesitaban realizar trasplantes alogénicos y que no tenían un donante familiar histocompatible tenían como única opción alternativa encontrar un donante voluntario de médula ósea que fuera histocompatible [30].
El éxito obtenido por los trasplantes realizados hizo crecer el entusiasmo por la creación de bancos de sangre de cordón umbilical. Fue así que comenzaron a desarrollarse programas piloto de banqueo de sangre de cordón para uso entre individuos no relacionados en New York, Milán, Dusseldorf, París y Londres. Los Bancos públicos, generalmente subsidiados por entidades gubernamentales o de bien público sin fines de lucro, se abocan a recolectar sangre de cordón donada por las gestantes quienes antes del momento del parto deben dar su consentimiento, pasando la sangre de cordón a ser propiedad del Banco. Esa sangre placentaria y del cordón umbilical, y la de la madre son estudiadas intensivamente con el objeto de minimizar el riesgo de transmisión de enfermedades infecciosas o genéticas y, además, en el caso de la sangre de cordón umbilical, para establecer su fenotipo desde el punto de vista del sistema HLA.
Los costos de mantenimiento de estos bancos son sumamente altos, ya que la instalación y las acciones a llevar a cabo para seleccionar las donantes, efectuar las recolecciones y el procesamiento de la sangre de cordón umbilical, así como los estudios a encarar son sumamente onerosos; el almacenamiento por tiempos prolongados, que en la mayoría de los casos se mide en años o lustros, hasta que se presenta la oportunidad de proporcionar el cordón para su utilización en trasplante, también representa un costo muy importante ya que es necesario disponer de instalaciones adecuadas, termos de almacenamiento y la provisión constante de nitrógeno líquido que según el tipo de termo a utilizar puede tener un consumo de 5 a 25 litros por día por termo. Ese es el motivo por el que para acceder a una unidad de sangre de cordón criopreservada en estos bancos sea necesario abonar entre U$D 15.000. - y U$D 30.000. - aproximadamente, según quien sea el Banco proveedor.
Cabe consignar además que dadas las estrictas condiciones que requieren esos bancos para aceptar una donación, se llega a almacenar solamente una pequeña fracción de los cordones congelados potencialmente disponibles, hay quienes han reportado un descarte de hasta el 50%.
La posibilidad de realizar congelación de sangre de cordón umbilical en forma privada para uso personal o familiar hizo que se crearan también una cantidad de bancos privados que ofrecen como servicio único, o complementario con otros, el congelamiento por tiempo indeterminado de la sangre de cordón umbilical con la finalidad de constituir un resguardo a futuro para el recién nacido o su grupo familiar. Es en este grupo en el que se ubica, por lo menos inicialmente, el objetivo de MaterCell.
Una de las limitaciones que tiene el uso de esta fuente celular es la escasa cantidad de células disponibles para trasplante lo que hace que muchos individuos no puedan acceder a su utilización para ser trasplantados ya que la relación células disponibles/peso corporal del receptor puede tornar inconveniente o, mejor expresado, altamente riesgosa dicha utilización.
Sin embargo ya hace varios años que se llevan a cabo técnicas de expansión in vitro que permiten aumentar varias veces la cantidad de células disponibles para ser utilizadas en trasplante a partir de muestras que serían por sí solas insuficientes[31-38]. Algunos sistemas de criopreservación, como el de uso en MaterCell, prevén la posibilidad de fraccionamiento del espécimen criopreservado destinando un 20% del mismo a utilización para expansión. Si bien por el momento no está disponible la tecnología de expansión celular en Argentina, la posibilidad de utilizar parte del espécimen sin inutilizar la mayor parte del mismo es una ventaja a futuro de la utilización de sistemas que lo permiten.
Existe un creciente cuerpo de investigaciones, que, impulsadas por las posibilidades que pueden tener estas células en la regeneración tisular, están demostrando su utilidad en regeneración de músculo cardíaco, páncreas y tejido neuronal [39].
También está la posibilidad de realizar modificaciones génicas en las células madre logrando luego de su trasplante la corrección de enfermedades hereditarias, como es el caso de la inmunodeficiencia combinada severa, o el rasgo talasémico, por ejemplo.
Se ha sugerido por estudios in vitro sobre unidades formadoras de colonias y LTC-IC (Células Iniciadoras de Cultivo a Largo Plazo) que la tecnología basada en la transferencia genética basada en retrovirus puede resultar en más eficientes transducciones en sangre de cordón que en médula ósea [40-42].
Todo este cuerpo de conocimientos nos ha alentado a desarrollar el Primer Banco de Sangre de Cordón Autólogo de la Argentina y ésta es la experiencia adquirida luego de las primeras 1153 criopreservaciones.
Material y Métodos
Recolección, Transporte y Recepción en Laboratorio:
Debido a que la oferta del servicio se realizó desde el comienzo simultáneamente en todo el territorio nacional, se decidió inicialmente que no se podría contar con la suficiente cantidad de equipos recolectores por lo que se eligió proporcionar capacitación a los obstetras intervinientes a los efectos de que fueran ellos mismos los recolectores en cada caso. A posteriori se entrenaron médicos, obstétricas, técnicas de hemoterapia e instrumentadoras con los que se conformó un equipo de recolección que atiende la mayoría de los nacimientos en Capital Federal y gran parte del Gran Buenos Aires durante las 24 hs de los 365 días del año. En general el recolector comienza su tarea una vez que se ha producido el clampeo y la sección del cordón umbilical. En primer lugar limpia adecuadamente la superficie del cordón con alcohol para eliminar los restos de sangre materna. Posteriormente desinfecta con iodo-povidona la zona donde realizará la punción, la que lleva a cabo con la aguja que tiene el equipo de recolección provisto. Se mantiene la sangre anticoagulada mediante mezcla gentil y frecuente producida por movimientos de rotación de la bolsa de recolección. El objetivo es lograr recuperar la mayor cantidad posible de sangre de cordón ya que la cantidad de células obtenidas es muy importante para la utilidad futura de la muestra.
Se definieron las recolecciones como: “Intra útero” cuando comenzaban inmediatamente después del nacimiento y terminaban mientras no se había producido el alumbramiento de la placenta. “Extra útero” cuando se realizaban íntegramente con la placenta fuera del útero. Y “Mixtas” cuando el inicio de la recolección comenzaba antes del alumbramiento placentario y finalizaba una vez que la placenta se encontraba fuera del útero.
Las recolecciones de las muestras se llevaron a cabo en bolsas plásticas estériles de 250 ml de capacidad, con anticoagulante CPD-Adenina (RIVERO S-90), del tipo de las que se utilizan por los bancos (sobre todo pediátricos) en la obtención de sangre de donantes. Finalizada la recolección y asegurado el cierre de la bolsa mediante tres nudos realizados firmemente en su tubuladura, se identifica la muestra con una etiqueta con un código de barras que es el que identifica al contrato y es único para cada contratante y se encuentra impreso o adherido en toda la documentación y en todos los elementos de procesamiento y almacenamiento que se utilizan para ese contrato.
Se estableció que el tiempo entre la recolección y la criopreservación de la muestra no debía ser superior a las 48 horas. En los casos en los que se violaba la condición, la aceptación de la muestra quedaba condicionada a que la viabilidad celular no fuera inferior al 60% del total, medida con la técnica del Azul Tripán.
La calidad de la muestra se evaluó según: 1) el tiempo transcurrido entre la recolección y el de la efectiva criopreservación; 2) el volumen de la muestra recolectada; 3) la existencia de tres nudos fuertes en la tubuladura para evitar filtraciones; 4) la inexistencia de aire dentro de la bolsa con la muestra; 5) la inexistencia de coágulos en el seno de la muestra; 6) una viabilidad celular de la muestra superior al 60%; y 7) el cumplimiento de las normativas para los recolectores en cuanto a consignar todos los datos solicitados en el formulario proporcionado junto con el Kit de recolección : a) Existencia de Anomalías Congénitas evidentes; b) Presencia de signos inflamatorios en el recién nacido o en la placenta/cordón umbilical; c) Presencia de vasos normales en el cordón umbilical; d) Existencia de desgarro placentario; e) Infección neonatal; f) Infección placentaria; e) Presencia de meconio; f) Score de APGAR; g) administración a la madre de antibióticos previos al nacimiento; h) Madre con estado febril; i) Sexo del recién nacido y j) Peso del recién nacido.
El traslado de la muestra desde el sitio de la recolección hasta el laboratorio donde se llevó a cabo el procesamiento quedó en todos los casos a cargo de los progenitores contratantes del servicio. Tuvo lugar dentro de una caja de plástico rígido encareciéndose el cuidado de no someterla a temperaturas extremas, manteniéndola en un rango de entre 15ºC y 25ºC (Temperatura ambiente).
La muestra es recibida en una instancia administrativa inicial y si cumple con las condiciones de envío establecidas es trasladada al laboratorio donde se efectúa un chequeo más completo. Finalizada la recepción se entrega al portador de la muestra un documento firmado por quien la recibió, donde figuran todos los datos relevados, del que queda una copia, con la firma del portador de la muestra en señal de conformidad, almacenada en el legajo correspondiente al contrato.
Procesamiento:
Una vez ingresada la muestra al laboratorio y luego del cálculo del volumen de la misma por el método de diferencias de peso, se procede a una desinfección de superficie de la bolsa que la contiene con iodo – povidona y se la ingresa al área protegida de la campana de flujo laminar (Forma Scientific modelo 1840), que se prepara desde no menos de 30 minutos antes del ingreso de la muestra mediante el encendido del flujo de aire y la limpieza cuidadosa de todas las superficies internas con alcohol isopropílico.
En forma aséptica se extrae un pequeño volumen de la muestra con el que se realiza: recuento leucocitario utilizando cámara de Neubauer y líquido de dilución de Türk; para considerar válido el recuento, el mismo se efectúa en los cuatro cuadrados de los extremos de la cámara lográndose un promedio de las cuatro lecturas, siempre que la diferencia entre cuadrados no supere los quince elementos, en cuyo caso se da por inválido y se repite el examen; fórmula leucocitaria en frotis coloreados con May Grünwald (Merck) – Giemsa (Merck) explorando los frotis con la técnica de la “Guarda Griega”, y viabilidad en cámara de Neubauer con colorante vital Azul Tripán.
Si la muestra cumple las condiciones de admisión se continúa el procesamiento.
En condiciones asépticas se agrega hidroxi-etil-almidón al 6% a la bolsa de recolección para una concentración del 20%. A continuación, siempre asépticamente, se conecta a la bolsa de recolección el set de bolsas de procesamiento y criopreservación de Thermogénesis donde se lleva a cabo el resto del procedimiento.
El objetivo del procesamiento consiste en disminuir el volumen de la muestra a criopreservar hasta los 20 ml, descartando el plasma y los glóbulos rojos excedentes.
Según el tiempo disponible para el procesamiento y criopreservación, que debe realizarse dentro de las 48 horas siguientes a la recolección, se elige la vía rápida en la que la separación de glóbulos rojos, células leucocitarias y plasma se lleva a cabo mediante centrifugación a bajas velocidades (50 G), o bien a través de la vía lenta en la que se aprovecha la fuerza de la gravedad durante un lapso de entre 6 y 12 horas.
Una vez establecida una interfase adecuada entre el plasma y la capa leucocitaria y entre ésta y la masa de glóbulos rojos se lleva a cabo la depleción de dichos elementos que no son de utilidad para mantenerlos criopreservados.
Del concentrado así obtenido se retira asépticamente una pequeña muestra y se procede a realizar recuento y fórmula leucocitaria. Si se demuestra que en la bolsa de procesamiento queda no menos del 60% de la celularidad total inicial y/o no menos del 80% de la cantidad total de mononucleares iniciales se sigue el procedimiento, de lo contrario se devuelve toda la muestra a la bolsa de recolección y se procede a una nueva separación siguiendo todos los pasos de la vía rápida, utilizando centrifugación a 50G.
Se toma una muestra suficiente para realizar todos los estudios, cuidando de dejar en la bolsa de procesamiento 20 ml del concentrado leucocitario.
Se disponen: 1 ml en frasco de hemocultivo neonatal estéril, 0,5 ml para la determinación de CD34, y una muestra ínfima para realizar los recuentos celulares y la determinación de viabilidad.
La bolsa con la muestra se preenfría a 4ºC en heladera, y luego se le adiciona un pack refrigerante para mantener el frío durante la incorporación de los 5 ml de la mezcla crioprotectora preenfriada consistente en DMSO para una concentración final de 10%, mezclado con Dextrano 40 a una concentración final de 9,1%. Durante la incorporación de la mezcla crioprotectora, la muestra se encuentra enfriada por el pack al que está adherida, en agitación continua mediante el uso de un agitador automático. La tasa de incorporación de las sustancias crioprotectoras es de 250 microlitros por minuto, que se logra utilizando una bomba de infusión continua para jeringas, controlada electrónicamente.
Finalizada la reducción de volumen y el agregado de la sustancia crioprotectora deben quedar 25 ml en la bolsa de procesamiento, los que una vez eliminado el aire remanente en la bolsa de criopreservación son trasladados a la misma haciendo que ocupen la totalidad de sus dos cuerpos, y toda la longitud de la tubuladura hasta el sitio en que se debe sellar para separarla definitivamente del set de procesamiento.
Criopreservacion
Una vez sellada la tubuladura de acceso a la bolsa de criopreservación se sellan los extremos para permitir el futuro eventual desglose de los dos cuerpos de la bolsa y se coloca el conjunto en un canister de acero dentro del cual es ubicada en la cámara de congelación del congelador de descenso programado (Thermo Forma Cryomed 7453) donde se aplica el programa de descenso elegido, en general con un descenso de 1º C por minuto al principio y luego una rampa mayor de 10 º C por minuto hasta los -90 º C. Una vez que la muestra ha llegado a la temperatura deseada se transfiere al termo de almacenamiento (Thermo Forma Cryo 743) donde queda definitivamente almacenada.
Resultados
Las 1153 recolecciones informadas se realizaron entre el 01/10/2003 y el 03/04/2005 en los siguientes lugares: 587 (50,9%) en Ciudad Autónoma de Buenos Aires, 413 (35,8%) en Provincia de Buenos Aires, 32 (2,8%) en Córdoba, 28 (2,4%) en Santa Fe, 22 (1,9%) en Mendoza, 15 (1,3%) en Salta, 14 (1,2%) en San Juan, 8 (0,7%) en Entre Ríos, 6 (0,5%) en Neuquén, 5 (0,4%) en Chubut, La Pampa y Río Negro, 3 (0,3%) en Uruguay, 2 (0,2%) en Tucumán y 1 (0,1%) en Corrientes, Formosa, La Rioja y Tierra del Fuego.
EFECTOR RECOLECCIÓN (1153) |
Total |
% |
Recolección por el equipo de MaterCell |
675 |
58,5 |
Recolección por obstetras sin asistencia |
478 |
41,5 |
Mediana |
Rango |
Media |
|
Edad materna (1147) |
33 años |
18 – 50 años |
33,33 años |
Edad gestacional (1150) |
39 semanas |
28,4 – 42 semanas |
38,7 semanas |
Peso de los R.N. |
3.300 gramos |
943 – 4.780 gramos |
3.282 gramos |
Sobre 1150 informados hubo 534 (46,4%) recién nacidos femeninos y 616 (53,6%) recién nacidos varones.
GRUPO ABO |
FRECUENCIA |
% |
Rh pos. |
% |
Rh neg. |
% |
A |
472 |
40,9 |
413 |
40,6 |
59 |
43,4 |
AB |
54 |
4,7 |
50 |
4,9 |
4 |
2,9 |
B |
122 |
10,6 |
108 |
10,6 |
14 |
10,3 |
O |
505 |
43,8 |
446 |
43,9 |
59 |
43,4 |
SCORE DE APGAR (1147) |
Frecuencia |
% |
2 |
2 |
0,2 |
3 |
5 |
0,4 |
4 |
3 |
0,3 |
5 |
5 |
0,4 |
6 |
13 |
1,1 |
7 |
37 |
3,2 |
8 |
133 |
11,6 |
9 |
939 |
81,9 |
10 |
10 |
0,9 |
DATOS DE CALIDAD DE LA RECOLECCION |
Bien |
% |
Mal |
% |
Nudos en cantidad y calidad correcta (1152) |
1101 |
95,6 |
51 |
4,4 |
Aire en la bolsa (1153) |
1120 |
97,1 |
33 |
2,9 |
Coágulos visibles (1153) |
1052 |
91,2 |
101 |
8,8 |
Formularios de informes completos (1151) |
1134 |
98,5 |
17 |
1,5 |
DATOS DE CALIDAD DE LA MUESTRA |
Mediana |
Rango |
Media |
Tiempo entre la recolección y la criopreservación |
38 h 42 m |
20 m - 124 h 40 m |
36 h 39 m |
Volumen de sangre de cordón |
69,8 ml |
4 ml – 221,5 ml |
73,9 ml |
Viabilidad al ingreso al laboratorio |
99 % |
64 % - 100 % |
98,99 % |
El tipo de separación celular mediante fuerza de gravedad, o procesamiento lento, se utilizó en 988 casos (85,7%), en tanto en los 165 (14,3%) restantes se utilizó el procesamiento rápido, que utiliza la fuerza centrífuga para la separación celular.
Sobre 1083 casos informados 1025 (94,6%) presentaron cultivos bacteriológicos y micológicos negativos, en tanto 58 casos (5,4%) presentaron contaminación con distintos gérmenes.
Los factores que estuvieron vinculados más frecuentemente al hallazgo de cultivos positivos fueron: parto vaginal, incluido el vaginal forcipal; la presencia de aire en la bolsa de recolección; la presencia de coágulos en la bolsa de recolección; la ausencia o flojedad de nudos en la tubuladura de la bolsa de recolección y la recolección hecha sin asistencia por el equipo de recolectores de MaterCell.
No hubo relación entre cultivos positivos y rotura de membrana a más de 24 horas del parto, administración de antibióticos a la parturienta (la tendencia observada no de 8,2% contra 5% no resultó significativa), la presencia de anomalías en el cordón, la presencia de desgarro placentario, la presencia de fiebre en la parturienta, la existencia de meconio, la presencia de signos inflamatorios o el tiempo total transcurrido entre la recolección y la criopreservación. Se supone a partir de estos resultados que la mejor adherencia a la técnica correcta de recolección y manipulación de la muestra evita o disminuye la contaminación microbiana.
CALIDAD DE LAS |
MEDIANA |
RANGO EN |
MEDIA |
Celularidad total |
895 |
27 - 5700 |
991 |
Celularidad mononuclear |
518 |
15 - 3078 |
570 |
Cantidad total de CD34+ |
4,39 |
0,088 – 63,52 |
6,64 |
Viabilidad de las células criopreservadas |
98% |
60% - 100% |
97,96% |
Si consideramos que 15 millones de células nucleadas trasplantadas por kilogramo de peso del receptor es la dosis mínima necesaria para realizar una regeneración exitosa de medula ósea, tenemos que de nuestras muestras almacenadas podrían lograrse 1102 trasplantes de individuos de más de 20 Kg (95,57%), 732 trasplantes de individuos de más de 50 Kg (63,48%) y 425 trasplantes de individuos de más de 70 Kg (36,8%). Es factible que con técnicas de expansión celular se pueda ampliar la posibilidad de utilización de las células disponibles.
Conclusiones
En 18 meses de actividad se han recolectado, criopreservado y almacenado 1153 unidades de sangre de cordón umbilical que tienen suficientes datos estudiados como para mostrar tendencias y características de nuestro Banco.
En principio se han recibido muestras de 16 provincias argentinas, la ciudad autónoma de Buenos Aires y de un país limítrofe donde no se había difundido la aparición del servicio. Esto habla de un amplio interés por el almacenamiento de la sangre de cordón a todo lo largo del país e inclusive en países vecinos.
La operación cesárea aporta la mayor parte de los nacimientos entre los contratantes de nuestro servicio, tendencia que es similar a la observada en general en la población.
Hay una tendencia a que la mayoría de las recolecciones sean asistidas por el equipo de recolección de MaterCell, lo que lleva a una mejor calidad de la muestra obtenida (data no mostrada).
Existe un 11% de las muestras que han sido criopreservadas más tarde que las 48 horas establecidas, esta demora en ocasiones está vinculada a la lejanía entre el sitio de obtención de la muestra y el Laboratorio de destino, no obstante existen casos en los que esta explicación no es aplicable y solamente puede explicarse por falta de compromiso de los familiares del contratante ya que nuestro laboratorio recibe muestras durante los 365 días del año, previo aviso. Esta demora perjudica gravemente la viabilidad de las células recolectadas.
Existe un bajo nivel de contaminación microbiana que seguramente puede disminuir si los recolectores adhieren estrictamente a las normas asépticas de recolección y manipulación de la muestra.
De acuerdo a la celularidad almacenada el 95,57% de las muestras almacenadas son aptas para regenerar médula ósea en individuos de más de 20 Kg, el 63,48% en individuos de más de 50 Kg y el 36,8% en individuos de más de 70 Kg, lo que desmiente algunas apreciaciones sobre la posible utilidad de las células almacenadas. La cantidad de muestras que deberían ser expandidas inevitablemente es escasa y representa el 4,42% del total.
Consideramos que dada la probada utilidad de las células madre presentes en la sangre del cordón umbilical y los vasos placentarios, la posibilidad de evitar su descarte, como es uso habitual, que MaterCell ofrece a quienes así lo desean representa un servicio de indudable valor.
BIBLIOGRAFÍA
1) Halbrecht J. Fresh and stored placental blood. Lancet 1939; ii: 1263±1671.
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